Лабораторная диагностика вирусных гепатитов С, В, А

Вирусные гепатиты — инфекционные воспалительные заболевания печени, самая распространённая в мире патология среди других печёночных поражений. В зависимости от вида вирусного гепатита диагностика заболевания базируется на клинических симптомах и лабораторных исследованиях. Большую роль играет тщательно выясненный анамнез заболевания и эпидемиологический анамнез. Выделяют несколько форм вирусного гепатита с учётом разновидности возбудителя, клинических проявлений, течения и тяжести болезни. Лабораторная диагностика вирусных гепатитов во многих случаях является единственным методом, позволяющим точно установить заболевание. В настоящее время выявлено и изучено несколько видов вирусов с гепатотропным действием (А, В, С, Д, Е), которые вызывают сходную клиническую картину. Из — за малосимптомности и трудности диагностики гепатита С, он считается самым тяжёлым из всех известных видов.

Вирусный гепатит А

Он имеет фекально — оральный путь передачи, что делает его широко распространённой инфекцией. Диагностика гепатита А не представляет больших трудностей. Инкубационный период относительно короткий – от 7 до 50 дней; характеризуется острым началом: появляется высокая лихорадка, выраженный астенический синдром, боли во всех суставах — клинически напоминает грипп. Длительность заболевания — 1 месяц. Лёгкое течение заболевания иногда не требует особых лечебных мероприятий, бывают случаи самоизлечения.

Вирусный гепатит В

Для субклинического течения лабораторная диагностика гепатита В является единственным точным методом для верификации диагноза – в крови определяются антиген вируса и антитела к белку возбудителя, а также ДНК ВГВ. Пути передачи:

• парентеральный – через кровь;
• половой – через сперму;
• вертикальный: от матери — плоду (через молоко матери вирус ребёнку не передаётся).

Инфекция попадает в организм при использовании грязных шприцов (использование одной иглы наркоманами), через инструменты (при проведении оперативных вмешательств, татуажа, иглоукалывания, прокалывания ушей, маникюра, педикюра), при гемотрансфузиях. Скрытый период — от 2 месяцев до полугода. Симптомы напоминает начало вирусного гепатита А: развивается гриппоподобный синдром, появляется ломота во всём теле и в суставах, сильная слабость, недомогание. Иногда возникают высыпания. Прогноз при остром гепатите относительно благоприятный: в 80% случаев наступает выздоровление. Субклиническая форма болезни часто приобретает хроническое течение – добиться полного излечения в таких случаях удаётся редко.

Одновременно при многих случаях заболевания определяется спутник гепатита В – вирус Д (дельта), вызывающий вирусный гепатит Д и усугубляющий течение основного заболевания.

Вирусный гепатит Е по клиническим симптомам напоминает ВГА, но имеет постепенное начало и гораздо опаснее для беременных.

Проявления ВГС

Лабораторная диагностика гепатита С (ВГС) в лабораторных условиях особенно важна, т. к. ним заражены около 3% населения земного шара. Ежегодно заболеваемость повышается — это связывают с неуклонным ростом наркомании в мире.

Острый ВГС протекает бессимптомно, поэтому диагностируется крайне редко. Если же удаётся выявить заболевание в этой фазе, то при своевременном начале лечения в 20 % может наступить выздоровление.

ВГС чаще всего наблюдается в хронической форме, на её поздних стадиях. Хронизация процесса происходит в 50% случаев.

При бессимптомном носительстве вируса С клетки печени постепенно повреждаются, развивается фиброз. В дальнейшем, если не проведено своевременное лечение, повышается риск возникновения цирроза или рака печени.

Диагностика вирусного гепатита при любой его форме основывается на определении:

• возбудителя и его репликации;
• маркеров инфицирования.

Методы диагностики включают иммунохимические и молекулярно – биологические реакции, благодаря которым выявляются:

• антигены возбудителя;
• антитела к вирусу;
• нуклеиновые кислоты.

Строение вируса С

Вирус С (ВС) имеет в своём геноме однонитчатую РНК. Он является единственным среди возбудителей вирусных гепатитов, имеющих такое строение. И носитель, и больной могут не догадываться об имеющемся у них вирусе. Поэтому для выявления патологии при неясном диагнозе необходимо проведение ряда исследований и диагностических тестов.

Геном вируса С (его РНК) состоит из 10 тысяч нуклеотидных оснований. Такая высокая гетерогенность определяет особенности ВГС. При изучении нуклеотидов РНК выявлены значительные различия в их строении. С учётом обнаруженных структурных особенностей создана классификация ВГС, согласно которой выделяют:

• варианты (их существует 6 — 9);
• подтипы;
• генотипы.

Одни из них встречаются во всех без исключения странах мира, некоторые — локально в определённых регионах. При проникновении в организм вирус С встраивается в цепочку нуклеотидов молекулы РНК. Он постоянно мутирует (видоизменяется), и человек может стать носителем сразу 50 подтипов одного генотипа вируса. Иммунная система не успевает за быстрой мутацией: вырабатываются антитела на одну группу вируса, болезнь становится хронической.

Определение вируса С

Диагностирование ВГС стало реальностью с появлением молекулярной биологии. Объясняется это крайне низким содержанием вируса в крови, что не позволяет выделять его антигены имеющимися ранее методами.

При подозрении на ВГС лабораторная диагностика направлена на определении:

• антител (Ig G, Ig M) методом ИФА (иммуноферментного анализа);
• РНК вируса с использованием ПЦР (полимеразной цепной реакции).

ПЦР — определение вируса гепатита С

РНК — ВГС относится к ранним маркерам ВГС: его появление в крови происходит на 10 — 12 день после заражения, т. е. гораздо раньше повышения аминотрансфераз (AST, ALT, GGT). Обнаружение РНК – ВГС указывает на активную репликацию (размножение) вируса. Это «золотой стандарт» диагностики, поскольку уточняет и подтверждает диагноз даже в период, когда симптомы болезни практически отсутствуют. ПЦР необходимо проводить для контроля результатов ИФА. Она выполняется в качественном и количественном вариантах.

Вирусная нагрузка считается высокой при ПЦР > 800 тысяч МЕ/мл или 2 миллиона копий/мл; низкой – при ПЦР < 800 тысяч МЕ/мл или < 2 миллионов копий/мл.

Если выявлены высокие цифры вирусной нагрузки, прогноз в плане выздоровления считается неблагоприятным. При низкой нагрузке сразу назначается лечение. Своевременным его проведением можно продлить жизнь или добиться полного излечения болезни.

ИФА — определение антител к вирусу

Иммунная система человека при попадании любого инфекционного агента вырабатывает антитела (Ig G, Ig M) к возбудителю. Образовавшиеся иммуноглобулины создают прочный комплекс с чужеродным белком (с антигеном вируса), количественные и качественные параметры которого определяются при проведении ИФА. Относится к непрямым методом обследования: при проведении выявляется не сам вирус, а возникает иммунный ответ организма на внедрившийся инфекционный агент. ИФА проводят для ранней диагностики, наблюдения процесса в динамике.

Антитела выявляются у 80% заражённых только к 5 — 6 неделе после начала болезни, у 90% — к 12 неделе. Иногда эти анализы дают ложноположительные ответы. Для таких случаев существуют специальные тесты — определяется спектр белков антител способом рекомбинантного иммуноблотинга.

Для достижения достоверных результатов обследование методами ПЦР и ИФА проводится дважды с некоторым промежутком времени. Как правило, временной отрезок составляет 6 месяцев.

Тактика наблюдения

Для уточнения активности процесса в печени, для определения тактики лечения, определяются печёночные пробы:

• трансаминазы крови (ALT, AST, GGT);
• общий билирубин и его фракции;
• щелочная фосфатаза (ЩФ);
• общий белок с фракциями.

В зависимости от полученных результатов лабораторных исследований применяется разная тактика ведения больного:

• При нормальных цифрах пациент находится под наблюдением врача. При изменениях в самочувствии анализы повторяются.
• При увеличении показателей в 2 и более раз проводится ИФА на анти — HCV.
• Если иммуноферментный анализ выявился положительным, используется ПЦР — полимеразная цепная реакция, по результатам которой проводится подбор противовирусной терапии.
• При повышенных в 2 раза и более показателях печёночных проб, но отрицательном ИФА, либо при повышении печёночных проб в 2 раза, положительном ИФА и отрицательной ПЦР продолжается динамическое наблюдение с осмотром и контролем биохимических анализов крови 1 раз в 3 месяца.
• При высоких биохимических показателях, положительных результатах ИФА и ПЦР проводят клиническую диагностику, подбирают противовирусный препарат, контролируют лечение.

Исследование биохимических показателей

По результатам биохимического анализа крови оценивается уровень аминотрансфераз.

• ALT — аланинаминотрансфераза — входит в состав гепатоцитов. Даже небольшое превышение нормы указывает на имеющийся гепатит (в т. ч. и вирусный) на ранних стадиях.
• AST — аспартатаминотрансфераза: если её уровень превышает показатели ALT, это показатель начинающегося фиброза (разрастания соединительной ткани).

Высокие показатели ALT, AST в крови является результатом некроза печёночной клетки. Они являются косвенным показателем активности воспалительного процесса. Если уровень ALT превышают норму в 3 раза, речь идёт о минимальной активности, в 3 — 10 раз —умеренная активность воспалительного процесса, более, чем в 10 раз — гепатит с высокой активностью.

Уровень AST изменяется и при других патологиях, ALT считается более специфичным для болезней печени.

• Увеличение уровня общего и прямого билирубина происходит при повышенном образовании или замедленном выведении его из организма. Вирусные гепатиты протекают с нарушением выведения билирубина. Иктеричность слизистых и склер наблюдается при уровнях билирубина выше 30 — 35 ммоль/л, при дальнейшем его накоплении желтеет кожа. При хроническом течении этого не происходит.
• Повышение щелочной фосфатазы (ЩФ), гаммаглютаминтрансферазы (GGT), холестерина и жёлчных кислот характерно для синдрома. Но болезни печени — это не единственная причина их повышения.
• Увеличение альбумина связано с нарушенной синтетической функцией печени.

Клиническая диагностика

В пользу вирусного гепатита С свидетельствуют клинические проявления. Хроническое течение характеризуется скудной симптоматикой: беспокоят недомогание и повышенная усталость к концу дня, снижение толерантности к привычным физическим нагрузкам. При нормальных биохимических анализах подобные клинические проявления редко связывают с вирусным гепатитом. Развёрнутая клиническая картина появляется на поздних стадиях: появляются телеангиэктазии и печёночные «звёздочки», гепато – и спленомегалия, желтушность склер, кожных покровов и слизистых полости рта, зуд кожи (при очень высоком уровне билирубина в крови), тёмная моча, обесцвеченный кал, кровоточивость, похудание, печёночные ладони.

Ультразвуковое исследование

Кроме лабораторных методов существуют дополнительные методы обследования, которые играют важную роль в диагностике ВГС. К ним относится УЗИ ОБП. При этом методе обследования изучается состояние органов брюшной полости. Определяются размеры, плотность, строение, расположение органов, выявляют объёмные образования, конкременты, нарушение оттока жёлчи, размеры портальной и селезёночной вены. Спленомегалия, гепатомегалия, расширение портальной вены указывают на гепатит с переходом в цирроз. Необходимо дальнейшее обследование, серодиагностика для исключения или подтверждения вирусного гепатита С.

Фибросканирование и другие тесты

Метод косвенной диагностики, эквивалент биопсии — фибросканирование (эластометрия): неинвазивный, безопасный, может проводиться неоднократно для контроля терапии. Показаниями для проведения эластометрии являются подозрения на патологические процессы в печени, в т. ч. – наличие вируса.

Существует также много диагностических тестов, которые являются альтернативой биопсии печени. Тесты дают возможность определить точную морфологическую картину поражённого органа, имеющегося фиброза, стеатоза, некроза или воспаления. Некоторые из них:

• ФиброТест — с его помощью проводится комплексный анализ 5 биохимических показателей и своевременная диагностика стадий фиброза.
• АктиТест — определяет 6 биохимических показателей и даёт возможность диагностировать некрозовоспалительный процесс в печени.